mvc view to pdf itextsharp : Adding text fields to pdf acrobat software SDK project winforms wpf windows UWP 9201500638-part1616

67 
Experimentation Committee of The Chinese University of Hong Kong (Reference 
No:  11/008/DRG)  and  all  animals  received  humane  care.  Eighteen  female 
Sprague-Dawley rats, 12 weeks old, with an average body weight of 220g, were used. 
The rats were randomly assigned to normal, sham and ACLT groups (n=6). In the 
ACLT group, a well-established protocol of ACL transection was adapted to induce 
knee OA [171, 172]. In brief, the rats were anaesthetized by intraperitoneal injection 
of ketamine  and xylazine (75  and 10mg/kg body  weight  respectively). A  medial 
parapatella arthrotomy was made, followed by a lateral displacement of patella and 
full flexion of the knee to expose the intra-articular joint space. The ACL was then 
transected  with micro-scissors  and successful  ACL transection was  assured by  a 
positive anterior drawer test (Figure 5.2). After rinsing the joint space with saline, 
the  joint  capsule  and  the  skin  was  closed  in  layers.  In  the  sham  group,  sham 
operation was performed with the same procedures except ACL transection. The rats 
were allowed free cage movement immediately after surgery. In the normal group, no 
operation was performed. Gait analysis (Section 5.2.8) was performed at pre-injury, 
1, 2, 3 and 6 months post operation. After collection of gait data at 3 months and 6 
months  post-injury,  reversal  test  by  a  single  intra-peritoneal  injection  of 
buprenorphine (0.025 mg/kg body weight) was performed according to our previous 
studies [173]. Gait analysis was performed again at 0.5 and 24 h after buprenorphine 
administration.  The  rats  were  then  euthanized  by  intra-peritoneal  injection  of 
overdose  pentobarbital  (20%  w/v)  to  harvest  knee  specimens  for  histological 
examination (Section 5.2.5)
Adding text fields to pdf acrobat - insert text into PDF content in C#.net, ASP.NET, MVC, Ajax, WinForms, WPF
XDoc.PDF for .NET, providing C# demo code for inserting text to PDF file
adding text fields to pdf acrobat; adding text to a pdf file
Adding text fields to pdf acrobat - VB.NET PDF insert text library: insert text into PDF content in vb.net, ASP.NET, MVC, Ajax, WinForms, WPF
Providing Demo Code for Adding and Inserting Text to PDF File Page in VB.NET Program
adding text to pdf online; how to add text to a pdf in preview
68 
5.1.4  The effect of intra-operative supplementation of vitamin C to promote 
healing in ACLR 
The animal experiments in this study were approved by the Animal Experimentation 
Ethics Committee in authors’ institution
(Ref. no.: 10/077/MIS). Experimental design 
of the present study was illustrated by a flowchart in Figure 5.3. The procedures of 
ACLR were performed according to Section 5.2.1 with 4 N graft tensioning. One 
hundred and fourteen male Sprague Dawley rats (12 weeks old, 400-450g) were used.
Under  general  anesthesia,  rats were operated  unilaterally  on the  right  knee. Ten 
milliliter freshly prepared vitamin C supplemented saline at doses of 3, 10, or 30 
mg/ml was used as irrigation solution throughout the surgery, and normal saline was 
used in control group. A sham group was operated to remove tendon graft at the 
ankle and  to open the knee joint capsule without ACL  transection. Gait analysis 
(Section 5.2.8) was performed at pre-injury, 4 weeks and 6 weeks post-operation 
(n=10). Blood samples for serum CRP levels (Section 5.2.4) were taken on day 1, 4, 
and 7 post-operation (n=4). At 6 weeks post operation, the animals were euthanized 
to harvest knee specimens for static knee laxity test (Section 5.2.6) and graft pullout 
Figure 5.2 
Anterior drawer test to confirm the success of ACL 
transection 
VB.NET PDF: How to Create Watermark on PDF Document within
Via our PDF Watermark Creator, users are capable of adding a designed watermark and customizing it on many aspects, for example, typing any text word and
add text box to pdf; adding text pdf file
VB.NET PowerPoint: VB Code to Draw and Create Annotation on PPT
other documents are compatible, including PDF, TIFF, MS in offering full options on adding and creating hand, free hand line, rectangle, text, hotspot, hotspot
add text in pdf file online; add text fields to pdf
69 
test (Section 5.2.7) (n=10). Histological scoring with H&E staining (Section 5.2.5) 
was performed in samples collected on day 1, 4, 7, and 42 post-operation (n=4). 
5.1.5  The effect of post-operative intra-articular injection of GHK-Cu 
The animal experiments in this study were approved by the Animal Experimentation 
Ethics  Committee  in  authors’  institution
(Ref.  no.:  11/054/GRF  and  460611). 
Experimental design of this study was illustrated by a flowchart in Figure 5.4. The 
procedures of ACLR were performed on the right knee according to our previous 
study Section 5.2.1 with 4N graft tensioning. Seventy-two male Sprague Dawley rats 
(12 weeks old, 400-450g) were used. Intra-articular injection of saline or GHK-Cu 
solution (Section5.2.3)  was  performed  weekly  from  2
nd
week  to  5
th
week  post 
Figure 5.3 
Experimental  design  for  the  study  of  the  effect  of 
intra-operative supplementation of vitamin C to promote 
healing in ACLR 
70 
operation. Gait analysis  (Section 5.2.8) was performed at pre-injury  and time of 
sample  collection  (6  or  12  weeks  post-operation)  (n=10).  At  6  or  12  weeks 
post-operation, the rats  were euthanized by intra-peritoneal  injection of overdose 
pentobarbital  (20%  w/v)  to  harvest  knee  specimens  for  static  knee  laxity  test 
(Section 5.2.6, modified laxity test) and graft pullout test (Section 5.2.7) (n=10). 
Histological scoring with H&E staining (Section 5.2.5) was performed in samples 
collected on 6 or 12 weeks post-operation (n=4).   
Figure 5.4 
Experimental  design  for  the  study  of  the  effect  of 
post-operative intra-articular injection of GHK-Cu 
71 
5.2  Methods 
5.2.1 
Animal surgery of ACLR (Figure 5.5) 
The procedures of ACLR were adapted from previous studies in rabbit [174] and rat 
[175]. Under general anesthesia by ketamine/xylazine 
(
75 and 10mg/kg body weight 
respectively), rats were operated unilaterally on the right knee. The flexor digitorum 
longus tendon (25mm in length and 1mm in diameter) was harvested by longitudinal 
medial incision of the right heel (Figure 5.5A). The graft was then detached with 
muscles and wrapped with gauze irrigated with 2ml testing saline. The knee joint 
capsule was opened, native ACL was excised and the successful transection was 
confirmed by a positive anterior drawer test (Figure 5.2). The knee joint was then 
rinsed with 2 ml irrigation saline. Tibia and femoral tunnels of 7mm in length and 1.2 
mm diameter (by 1.1 mm drill bit) were created from the footprints of the native 
ACL to the medial side of tibia and the lateral femoral condyle, respectively (Figure 
5.5B). The debris in the each bone tunnel was then rinsed with 2ml irrigation saline. 
The tendon graft was inserted through both bone tunnels and the graft was fixed to 
the  tibial  periosteum  first (Figure 5.5C).  Through  a  pulley  system,  a  freely 
suspended weight was used to provide a constant tensioning force of 4N to the graft 
during its fixation to the neighboring femoral periosteum (Figure 5.6). Finally, the 
knee joint was rinsed with 2ml irrigation saline, the fascia and other soft tissues were 
closed in layers (Figure 5.5D), and the animals were allowed free cage movements 
after operation. In sham group, tendon graft was removed from ankle, and knee joint 
was opened and closed without ACL transection and reconstruction. All animals were 
given 0.05ml Temgesic as analgesics.   
72 
Figure 5.5 
Surgical procedure for ACLR in rat included (A) harvest 
of  ipsilateral  flexor  tendon  graft,  (B)  drilling  of  bone 
tunnels,  (C)  tibial  fixation  and  graft  tensioning,  (D) 
femoral fixation and  closure of joint capsule  and  skin 
wound 
Figure 5.6 
Schematic diagram for the set-up of graft tensioning for 
ACLR surgery in rat 
73 
5.2.2  Formulation of vitamin C irrigation saline 
Since  ascorbate  subjects  to  auto-oxidation,  deoxygenation  of  Milli-Q  water  was 
performed prior to dissolution of sodium ascorbate by thermal removal of dissolved 
gaseous oxygen. The deoxygenated water was then left cooled down and kept in a 
sealed  container  before  preparation  of  vitamin  irrigation  solution.  Vitamin  C 
irrigation solution was formulated in 3 doses at 3, 10, 30 mg/ml using sodium-L- 
ascorbate (Na Ascorbate) (Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, USA). To achieve an 
isotonic solution with physiological saline, the final  osmolality  of the vitamin  C 
irrigation  solution  was  adjusted  to  300  mOsm/L  with  sodium  chloride  (NaCl) 
(Sigma-Aldrich). The  resulting solution contained  either (1) 3mg/ml (15mM)  Na 
Ascorbate with 7.8g/L NaCl, (2) 10mg/ml (50mM) Na Ascorbate with 5.8g/L NaCl, 
or (3) 30mg/ml (150mM) Na Ascorbate. Normal saline with 9 g/L NaCl was used as 
control. The irrigation solutions were then sterilized by filtering through a 0.22 
µ
syringe filter. The vitamin C irrigation saline was prepared freshly before animal 
surgery. 
5.2.3  Intra-articular injection of GHK-Cu 
GHK-Cu was prepared by dissolving GHK (Sigma G1887) and Copper (II) sulphate 
(Merck  Art  2791)  in  0.9  %  saline  in  2:1  molar  ratio.  The  resulting  10  mg/ml 
GHK-
Cu stock solution was filtered through 0.22 μm filter (Millipore), aliquoted and 
kept frozen until use. Intra-articular injection of GHK-Cu or saline was performed 
weekly,  started  from  2
nd
week  to  5th  week  post  operation.  The  rats  were 
anaesthetized with ~0.8 ml mixture of ketamine and xylazine (75 and 10mg/kg body 
weight respectively Ketamine/xylazine/saline mixture at 3:2:2 v/v ratio). The knee 
was shaved and cleansed with 70% ethanol. GHK-Cu solution or saline was loaded 
into  a  Hamilton  micrometer  syringe  with  26G  removable needle.  With  the knee 
extended, the needle was inserted from medial side of patella to bottom of patella at a 
74 
distal  direction (Figure 5.7)  to  access  the  intra-articular  space  [176],  50 
μ
l  of 
GHK-Cu solution or saline was injected. The rats were allowed to recover before 
returning to the cages. 
5.2.4  Serum test of C-reactive protein 
To  examine  whether  post-operative  inflammatory  response  will  be  affected  by 
intra-operative application of vitamin C irrigation saline, serum level of C-reactive 
protein (CRP), an acute phase protein produced at early inflammatory phase [177], 
was  measured  by  enzyme-linked  immunosorbent  assay  (ELISA)  according  to 
manufacturer’s instruction (BD BioSciences, Franklin Lakes, NJ, USA).
On day 1, 4, 
and 7 post-operation, rats were anaesthetized and 0.5ml blood was obtained from tail 
Figure 5.7 
Intra-articular injection of GHK-Cu or saline in rat 
75 
vein. Blood was centrifuged at 2000g for 15 min. Collected serum was centrifuged 
again at same speed for 10 min and stored at -20
º
C until assay was performed (n=4).   
5.2.5  Histology 
Histological processing, sectioning and examination 
At  the  date  of  sample  collection,  the  rats  were  euthanized  by  intra-peritoneal 
injection of overdose pentobarbital (20% w/v) and the knee joint segments (1 cm 
proximal and distal from the joint gap) were dissected. The samples were fixed in 4% 
buffered formalin for 1 day with constant shaking. Then the samples were decalcified 
in  9%  formic  acid  for  4  weeks  with  constant  shaking  and  the  formic  acid  was 
renewed  weekly.  The  decalcified  samples  were  trimmed,  dehydrated  through 
immersions in graded ethanol and xylene at last. The samples were then embedded in 
paraffin  wax  with  lateral  side  facing  towards  the  sectioning  plane  in  plastic 
embedding cassette. Five-micrometer-thick paraffin sections along the sagittal plane 
of the knee were collected in groups of 20 consecutive sections. 2
3 sections from 
each  group  were  chosen  for  histological  examination  of  femoral  tunnels, 
intra-articular  graft  mid-substance  or  tibial tunnels with Haematoxylin  and eosin 
(H&E) staining (Table 5.1). As the healing responses varied along the tunnel from 
intra-articular to extra-articular exits [4], sections from the epiphyseal region was 
chosen for comparison of graft healing inside tunnels. H&E stained sections were 
examined  under  bright  field  and  polarized  illumination  (Leica  Microsystems, 
Germany). 
76 
Table 5.1  
Experimental procedure of H&E staining 
Step  Reagent 
Time   
1.   
Xylene   
100% ethanol 
90% ethanol 
70% ethanol 
H
2
5 min (x2)   
3 min 
2 min 
2 min 
2 min 
2. 
Harris Haematoxylin 
10 min 
3.   
Running H
2
1 min 
4. 
Acid alcohol   
1 sec 
5. 
Running H
2
1 min   
6. 
Scott’s tap water
3 min 
7. 
H
2
O   
1 min 
8. 
1% Eosin Yellowish 
5 min   
9. 
70% EtOH     
80% EtOH     
90% EtOH     
100% EtOH  
100% EtOH  
xylene 
xylene 
5 sec 
5 sec 
10 sec 
3 min   
5 min 
3 min 
5 min 
10. 
DPX 
H
2
O: water; EtOH: ethanol; DPX: DPX mountant for histology (Sigma-Aldrich) 
Histological scoring system 
Histological  evaluation  was  carried  out  by  two  independent  examiners  (Fu 
Sai-Chuen and Cheuk Yau-Chuk) according to a scoring system developed by our 
group, based on the extent of graft degeneration, the bone tunnel healing, and graft 
incorporation at tunnel interface (Table 5.2)
Documents you may be interested
Documents you may be interested