itextsharp add annotation to existing pdf c# : Add url pdf control application system azure web page asp.net console 16600332-part1795

15
4.  Pour LB nutrient agar plates (LB, LB/amp, LB/amp/ara)
First, pour LB nutrient agar into the 16 plates that are labeled LB. Stack the empty
plates 4 to 8 high and starting with the bottom plate lift the lid and the upper plates straight
up and to the side with one hand and pour the LB nutrient agar with the other. Fill the plate
about one-third to one-half (~12 ml) with agar, replace the lid and continue up the stack.
Pour 16 plates in this fashion. Let the plates cool in this stacked configuration.
Second, add the hydrated ampicillin to the remaining LB nutrient agar. Swirl briefly to
mix. Pour into the 16 plates that are labeled as LB/amp using the technique utilized above. 
Third, add the hydrated arabinose to the remaining LB nutrient agar containing
ampicillin. Swirl briefly to mix and pour into the 8 plates labeled as LB/amp/ara using
the technique utilized above.
Plates should set within 30 minutes.
5.  Plate storage
After the plates have cured for two days at room temperature they may either be used or
stacked up twenty high in a plastic sleeve bag slipped back down over them. By coveringthe
plates with the plastic bag the plates will stay hydrated. The stack is then inverted, the bag
taped closed, and the plates stored upside-down at 4°C until used. The plates are inverted
to prevent condensation on the lid, which may drip onto the agar. 
LB
LB/amp
amp
ara
LB/amp/ara
INSTRUCTOR'S ADVANCE
PREPARATION GUIDE
Add url pdf - insert, remove PDF links in C#.net, ASP.NET, MVC, Ajax, WinForms, WPF
Free C# example code is offered for users to edit PDF document hyperlink (url), like inserting and deleting
pdf edit hyperlink; c# read pdf from url
Add url pdf - VB.NET PDF url edit library: insert, remove PDF links in vb.net, ASP.NET, MVC, Ajax, WinForms, WPF
Help to Insert a Hyperlink to Specified PDF Document Page
add url to pdf; convert a word document to pdf with hyperlinks
Advance Preparation Step 2:  24–36 hr before Transformation
Laboratory
1.  Rehydrate bacteria
Using a sterile pipet, rehydrate the lyophilized 
E. coli
HB101 by adding 250 µl of Transformation
solution directly to the vial. Recap the vial and allow the cell suspension to stand at room 
temperature for 5 min. Then shake to mix before streaking on LBstarter plates (Transformation
solution is being used here because it is a handy sterile solution. Sterile water would work just as
well.) Store the rehydrated bacteria in the refrigerator until used (within24 hours for best results,
no longer than 3 days).
2.  Streak starter plates to produce single bacterial colonies on agar plates
Each lab team will need their own starter plate as a source of cells for transformation. This
kit contains sufficient material to outfit eight complete student workstations. LB plates
should be streaked for single colonies and incubated at 37°C for 24–36 hr before the 
transformation activity is planned.
Using the rehydrated 
E. coli
you prepared in the last step and eight LB agar plates 
(prepared in step one), streak one starter plate for each of your student teams. The purpose
of streaking is to generate single colonies from a concentrated suspension of bacteria. A
minute amount of the bacterial suspension goes a long way. Under favorable conditions,
one cell multiplies to become millions of genetically identical cells in just 24 hr. There are
millions of individual bacteria in a single 1 mm bacterial colony.
a. Insert a sterile inoculation loop into the rehydrated bacterial culture. Insert the loop
straight into the vial. Remove the loop and streak the plates as illustrated below.
Streaking takes place sequentially in four quadrants. The first streak is to just spread
the cells out a little. Go back and forth with the loop about a dozen times in each of the
small areas shown. In subsequent quadrants the cells become more and more dilute,
increasing the likelihood of producing single colonies.
b. For subsequent streaks, the goal is to use as much of the surface area of the plate as
possible. Rotate the plate approximately 45 degrees (so that the streaking motion is
comfortable for your hand) and start the second streak. Do not dip into the rehydrated
bacteria a second time. Go into the previous streak about two times and then back
and forth as shown for a total of about 10 times.
c. Rotate the plate again and repeat streaking.
d. Rotate the plate for the final time and make the final streak. Repeat steps a–d with
the remaining LB plates for however many student workstations there will be. Use
the same inoculation loop for all plates. When you are finished with each plate, cover
it immediately to avoid contamination.
250 µl
Transformation solution
Lyophilized
E. coli
16
INSTRUCTOR'S ADVANCE
PREPARATION GUIDE
C#: How to Open a File from a URL (HTTP, FTP) in HTML5 Viewer
License and Price. File Formats. PDF. Word. Excel. PowerPoint. Tiff. DNN (Dotnetnuke). Quick to Start. Add a Viewer Control on Open a File from a URL (HTTP, FTP).
add links to pdf online; add links to pdf in acrobat
C#: How to Add HTML5 Document Viewer Control to Your Web Page
addTab(_tabRedact); //add Tab "Sample new UserCommand("pdf"); _userCmdDemoPdf.addCSS( new customStyle({ background: "url('RasterEdge_Resource_Files/images
adding links to pdf document; add links pdf document
e. Place the plates upside down inside the incubator overnight at 37°C or at room temperature
for 2–3 days if an incubator is not available. Use for transformation within 24–36 hours as
bacteria must be actively growing to achieve high transformation efficiency. Delaying
more than 36 hours will compromise transformation. DO NOT REFRIGERATE BEFORE USE.
f.
E. coli
forms off-white colonies that are uniformly circular with smooth edges. Avoid
using plates with contaminant colonies.
3.  Prepare pGLO plasmid
Using a new sterile pipet add 250 µl of transformation solution into the vial of lyophilized
pGLO plasmid DNA. Note that the quantity of DNA is so small that the vial may appear
empty. Invert the vial to mix plasmid solution well and ensure that the DNA is dissolved and
is not sticking to the cap. If possible store the hydrated DNA in a refrigerator.
(Transformation solution is being used here because it is a handy, sterile and nuclease-free
solution. Sterile water would work just as well.)
Advance Preparation Step 3:  Before Transformation Laboratory 
1.  Aliquot solutions
For each student workstation, aliquot 1 ml of transformation solution (CaCl
2
) and 1 ml of LB
nutrient broth into separate color-coded 2 ml microtubes provided in the kit. If the LB nutrient
broth is aliquoted 1 day prior to the lab it should be refrigerated. Label the tubes.
2.  Set up workstations for transformation laboratory
See page 11 for materials to be supplied at each workstation.
b
a
c
d
250 µl
Transformation solution
Lyophilized pGLO plasmid DNA
17
INSTRUCTOR'S ADVANCE
PREPARATION GUIDE
C# PDF Library SDK to view, edit, convert, process PDF file for C#
editing PDF document hyperlink (url) and quick navigation link in PDF bookmark. C#.NET: Edit PDF Metadata. PDF SDK for .NET allows you to read, add, edit, update
add hyperlinks to pdf; convert excel to pdf with hyperlinks
C# Image: How to Download Image from URL in C# Project with .NET
Add this imaging library to your C#.NET project jpeg / jpg, or bmp image from a URL to your provide powerful & profession imaging controls, PDF document, tiff
pdf link; add hyperlink to pdf
18
Transformation Kit—Quick Guide
1. Label one closed micro test tube
+pGLO and another -pGLO.
Label both tubes with your
group’s name. Place them in the
foam tube rack. 
2. Open the tubes and using a 
sterile transfer pipet, transfer 
250 µl of transformation solution
(CaC1
2
) into each tube.
3. Place the tubes on crushed ice.
Do not use cubed ice.
6. Incubate the tubes on ice for
10 min. Make sure to push the
tubes all the way down in the
rack so the bottom of the tubes
stick out and make contact with
the ice.
5. Examine the pGLO plasmid DNA
solution with the UV lamp. Note
your observations. Immersea new
sterile loop into the plasmidDNA
stock tube. Withdraw a loopful.
There should be a film of plasmid
solution across the ring. This is
similar to seeing a soapy film
across a ring for blowing soap
bubbles. Mix the loopful into the cell
suspensionof the +pGLO tube.
Optionally, pipet 10 µl of pGLO
plasmid into the +pGLO tube and
mix. Close the -pGLO tube and return
it to the rack on ice. Do not add
plasmidDNA to the -pGLO tube.
Why not? Close the -pGLGO tube
and return it to the rack on ice.
+pGLO
-pGLO
Transformation
solution
-pGLO
plasmid DNA
Ice
Rack
-pGLO
Ice
250 µl
+pGLO
+pGLO
+pGLO
-pGLO
+pGLO
-pGLO
4.  Use a sterile loop to pick up a 
single colony of bacteria from your
starter plate. Pick up the +pGLO
tube and immerse the loop into the
transformation solution at the 
bottomof the tube. Spin the loop
between your index finger and
thumb until the entire colony is 
dispersed in the transformation
solution (with no floating chunks).
Place the tube back in the tube
rack in the ice. Using a new sterile
loop, repeat for the -pGLO tube.
QUICK GUIDE
C# PDF insert image Library: insert images into PDF in C#.net, ASP
C#.NET PDF SDK - Add Image to PDF Page in C#.NET. How to Insert & Add Image, Picture or Logo on PDF Page Using C#.NET. Add Image to PDF Page Using C#.NET.
adding hyperlinks to pdf; add page number to pdf hyperlink
C# HTML5 PDF Viewer SDK to view PDF document online in C#.NET
Insert Image to PDF. Image: Remove Image from PDF Page. Cut Image in Page. Link: Edit URL. Bookmark: Edit Images. Redact Pages. Annotation & Drawing. Add Sticky Note
add links to pdf acrobat; accessible links in pdf
19
10.  Gently flick the closed tubes with
your finger to mix. Using a new
sterile pipet for each tube,
pipet 100 µl from each of the
tubes to the corresponding
plates, as shown on the diagram
onto the appropriate plates.
11.  Use a new sterile loop for each
plate. Spread the suspensions
evenlyaround the surface of the
agar by quickly skating the flat
surface of a new sterile loop
back and forth across the plate
surface.
12. Stack up your plates and tape
them together. Put your group
name and class period on the 
bottom of the stack and place the
stack upside down in the 37°C
incubator until the next day.
7.  While the tubes are sitting on
ice, label your four agar plates
on the bottom (not the lid) as 
shown on the diagram.
8. Heat shock. Using the foam rack
as a holder, transfer both the (+)
pGLO and (-) pGLO tubes into
the water bath, set at 42°C, for
exactly50 seconds.Make sure to
push the tubes all the way down
in the rack so the bottom of the
tubes stick out and make contact
with the warm water. When the
50 seconds have passed, place
both tubes back on ice. For the
best transformationresults, the
change from the ice (0°C) to
42°C and then back to the ice
must be rapid. Incubate tubes
on ice for 2 min.
LB-Broth
100 µl
Ice
Ice
Water bath
42°C for 50 sec
9.  Remove the rack containing the
tubes from the ice and place on
the bench top. Open a tube and,
using a new sterile pipet, add
250 µl of LB nutrient broth to the
tube and reclose it. Repeat with
a new sterilepipet for the other
tube. Incubate the tubes for 
10 min at room temperature.
250 µl
L
B
/
a
m
p
pGLO
L
B/
a
m
p/ar
a
pGLO
L
B/
a
m
p
pGLO
L
B
pGLO
L
B
-
p
G
O
L
L
B
/
a
m
p
-
p
G
O
L
L
B
/
a
m
p
+
p
G
O
L
L
B/
a
m
p/ar
a
+
p
G
O
L
+pGLO
-pGLO
QUICK GUIDE
VB.NET PDF- View PDF Online with VB.NET HTML5 PDF Viewer
to PDF. Image: Remove Image from PDF Page. Image Link: Edit URL. Bookmark: Edit Bookmark. Metadata: Edit, Delete Redact Pages. Annotation & Drawing. Add Sticky Note
adding an email link to a pdf; add hyperlink to pdf in preview
VB.NET Image: VB Code to Download and Save Image from Web URL
Apart from image downloading from web URL, RasterEdge .NET Imaging SDK still dedicated to provide powerful & profession imaging controls, PDF document, image
add links to pdf document; pdf link to email
20
Instructor’s Answer Guide
Lesson 1  Focus Questions
1. To genetically transform an entire organism, you must insert the new gene(s) into every
cell in the organism. Which organism is better suited for total genetic transformation–one
composed of many cells, or one composed of a single cell?
A single-celled organism would be the best recipient for a genetic transformation,
because it contains only one cell which needs to take up the new gene.
2. Scientists often want to know if the genetically transformed organism can pass its new
traits on to its offspring and future generations. To get this information, which would be
a better candidate for your investigation, an organism in which each new generation
develops and reproduces quickly, or one which does this more slowly?
An organism which reproduces quickly. Fast production of offspring or new
progeny will allow you to quickly assess if the new trait has been passed on.
3. Safety is another important consideration in choosing an experimental organism. What
traits or characteristics should the organism have (or not have) to be sure it will not
harm you or the envi ronment?
The organism should not produce any toxins or compounds which could make
people sick. The organism should grow vigorously in the lab environment, but
should not be able to survive outside the laboratory. The organism should not be
able to infect plants or animals.
4. Based on the above considerations, which would be the best choice for a genetic 
transforma tion: a bacterium, earthworm, fish, or mouse? Describe your reasoning.
A bacterium would be the best host organism. Bacteria are small, single-celled
organisms which reproduce quickly and easily.
Note:  The bacterium 
Escherichia coli (E. coli)
strain HB101 K-12, best fits the require-
ments described above:  it is made of only one cell, it reproduces every 
20 minutes, it does not make people sick, and it cannot survive outside the laboratory.
TEACHER’S ANSWER
GUIDE
21
Lesson 1  Consideration Questions
Recall that the goal of genetic transformation is to change an organism’s traits 
(phenotype). Before any change in the phenotype of an organism can be detected, a
thorough examination of its usual (pre-transformation) phenotype must be made. Look
at the colonies of 
E. coli
on your starter plates. List all observable traits or characteristics
that can be described.
Color of colonies, number of colonies, distribution of colonies on the plate.
Describe how you could use two LB nutrient agar plates, some 
E. coli
, and some 
ampicillin to determine how 
E. coli
cells are affected by ampicillin.  
Equal amounts of cells could be plated on two different LB nutrient agar plates,
one which contains just LB nutrient agar and one which contains LB nutrient
agar ampicillin. The growth of 
E. coli
could be compared on the two plates. If 
ampicillin negatively affects the growth of 
E. coli
, then there should be fewer
colonies of bacteria on that plate. If ampicillin has no effect, there should be
approximately equal numbers of colonies on both plates.
Results: What would you expect your experimental results to indicate about the effect
of ampicillin on the 
E. coli
cells?
Antibiotics usually kill bacteria (are bacteriocidic) or inhibit their growth 
(bacteriostatic). Thus, there should be few, if any, bacterial colonies present on
the ampicillin plate. The presence of any colonies on the ampicillin plate would
suggest that those bacteria are resistant to the antibiotic ampicillin.
TEACHER’S ANSWER
GUIDE
22
Lesson 2  Review Questions
1.  On which of the plates would you expect to find bacteria most like the original 
untransformed 
E. coli
colonies you initially observed? Explain your prediction.
Bacteria which resemble the non-transformed  will be found on the LB/(-) pGLO
plate. These bacteria were removed from the starter plate, did not have any 
plasmid added to them, and were replated on an LB plate. Thus, they are virtually
identical to the non-transformed starter .
2. If there are any genetically transformed bacterial cells, on which plate(s) would they
most likely be located? Explain your prediction.
The transformed cells are found on the LB/amp and LB/amp/ara plates.
Genetically transformed cells have taken up the pGLO plasmid which expresses
the ampicillin resistance gene—these cells can survive on the plates which 
contain ampicillin.
3. Which plates should be compared to determine if any genetic transformation has
occurred?  Why?
The LB/amp (-) pGLO and the LB/amp (+) pGLO plates should be directly 
compared. Cells which were not treated with DNA (-pGLO) should not be
expressing the ampicillin resistance gene and will not grow on the LB/amp
plates. Cells which were treated with DNA (+pGLO) should contain the pGLO
plasmid and should express the ampicillin resistance gene—the corresponding
LB/amp plate will contain transformed bacterial colonies.
4. What is meant by control plate? What purpose does a control serve?
A control plate is a guide that is used to help you interpret the experimental
results. In this experiment, both (-) pGLO plates are control plates. The LB/amp
control plate can be compared to the LB/amp (+)pGLO plate. This comparison
shows that genetic transformation produces bacterial colonies that can grow on
ampicillin (due to the uptake of the pGLO plasmid and the expression of the
ampicillin resistance gene). The (-) pGLO/LB control plate can be compared to
any of the LB/amp plates to show that plasmid uptake is required for the growth
in the presence of ampicillin. The (-) pGLO LB/amp plate shows that the starter
culture does not grow on the LB/amp plate. Without this control one would not
know if the colonies on the LB/amp (+) pGLO plate were really transformants.
TEACHER’S ANSWER
GUIDE
23
Lesson 3  Data Collection and Analysis
1. Observe and draw what you see on each of the four plates. Put your drawings in the
data table in the column on the right. Alternatively the protocol can incorporate digital
documentation of the plates with Vernier’s Blue Digital BioImaging System (Appendix E).
Record your data to allow you to compare observations of the “+ pGLO” cells with
those you record for the untrans formed 
E. coli
. Write down the following observations
for each plate.
2. How much bacterial growth do you see on each, relatively speaking?  
There should be multiple colonies on both the LB/amp and LB/amp/ara plates
that received the pGLO plasmid (approximately ~ 75 colonies). There should be
no growth on the LB/amp (-) pGLO plate. There should be a lawn of bacteria on
the LB (-) pGLO plate.
3. What color are the bacteria?  
The bacteria on the (+) pGLO LB/amp plate and the (-) pGLO LB plates should be
whitish. The bacteria on the (+) pGLO LB/amp/ara plate should appear whitish
when exposed to normal, room lighting, but fluoresce bright green upon exposure
to the long-wave UV light.
4. Count how many bacterial colonies there are on each plate (the spots you see).
There should be approximately ~ 75 bacterial colonies on the two (+) pGLO
plates. The lawn of bacteria on the LB plate contains an even spread of bacteria
and individual colonies can’t be counted.
Plates
Observations
+pGLO, LB/amp
Many transformed colonies of bacteria (approximately ~75).
Colonies appear white.
+pGLO,
Many transformed colonies of bacteria (approximately ~75)
Colonies 
appear white when exposed to room light but fluoresce 
LB/amp/ara
bright green when exposed to UV light.
–pGLO, LB/amp
No bacterial growth present on this plate.
–pGLO, LB
An even lawn of bacteria is present on this plate. The lawn
appears off-white.
TEACHER’S ANSWER
GUIDE
24
Lesson 3  Analysis of the Results
1. Which of the traits that you originally observed for 
E. coli
did not seem to be come
altered? In the space below list these non-transformed traits and how you arrived at this
analysis for each trait listed.
Original trait
Analysis of observations
Color
Bacteria are a whitish color
Colony size
Colony size is similar both before and after transformation
2. Of the 
E. coli
traits you originally noted, which seem now to be significantly different
after performing the transformation procedure? List those traits below and describe the
changes that you observed. 
New trait
Observed change
Color
The colonies on the LB/amp/ara plate fluoresce green
under UV light
Ampicillin
The transformed colonies can grow on ampicillin 
resistance
3. If the genetically transformed cells have acquired the ability to live in the presence of
the antibiotic ampicillin, then what can be inferred about the other genes on the plasmid
that were involved in your transformation procedure?
The plasmid must express a gene for ampicillin resistance (the protein product 
of the 
bla
gene codes for beta-lactamase, the protein that breaks down ampicillin).
4. From the results that you obtained, how could you prove that these changes that
occurred were due to the procedure that you performed?  
The best way is to compare the control to the experimental plates. Cells that
were not treated with the plasmid (LB/amp (-) pGLO and LB/amp/ara (-) pGLO
plates) could not grow on ampicillin, whereas cells that were treated with the
plasmid (LB/amp (+) pGLO and LB/amp/ara (+) pGLO plate) can grow on the
LB/amp plate. Thus, the plasmid must confer resistance to ampicillin.
TEACHER’S ANSWER
GUIDE
Documents you may be interested
Documents you may be interested