Consideration 3:  The Genes
Genetic transformation involves the insertion of some new DNA into the 
E. coli
cells. In addition to one large chromosome, bacteria often contain one or more small
circular pieces of DNA called plasmids. Plasmid DNA usually contains genes for more
than one trait. Scientists use a process called genetic engineering to insert genes coding
for new traits into a plasmid. In this case, the pGLO plasmid has been genetically 
engineered to carry the GFP gene which codes for the green fluorescent protein, GFP,
and a gene (
bla
) that codes for a protein that gives the bacteria resistance to an antibiotic.
The genetically engineered plasmid can then be used to genetically transform bacteria
to give them this new trait.
Consideration 4:  The Act of Transformation
This transformation procedure involves three main steps. These steps are intended to
introduce the plasmid DNA into the 
E. coli
cells and provide an environment for  the cells to
express their newly acquired genes.
To move the pGLO plasmid DNA through the cell membrane you will:
1. Use a transformation solution containing CaCl
2
(calcium chloride).
2. Carry out a procedure referred to as heat shock.
For transformed cells to grow in the presence of ampicillin you must:
3. Provide them with nutrients and a short incubation period to begin expressing their
newly acquired genes.
35
pGLO plasmid DNA
GFP
Flagellum
Pore
Cell
wall
Beta-lactamase
(antibiotic resistance)
Bacterial
chromosomal
DNA
STUDENT MANUAL
LESSON 1
Pdf link - insert, remove PDF links in C#.net, ASP.NET, MVC, Ajax, WinForms, WPF
Free C# example code is offered for users to edit PDF document hyperlink (url), like inserting and deleting
pdf hyperlinks; add email link to pdf
Pdf link - VB.NET PDF url edit library: insert, remove PDF links in vb.net, ASP.NET, MVC, Ajax, WinForms, WPF
Help to Insert a Hyperlink to Specified PDF Document Page
add hyperlink pdf file; clickable pdf links
Lesson 2  Transformation Laboratory
Workstation 
(
Checklist
Your workstation: Materials and supplies that should be present at your workstation prior
to beginning this lab are listed below.
Student workstation
Material
Quantity
(✔)
E. coli 
starter plate
1
Poured agar plates (1 LB, 2 LB/amp, 1 LB/amp/ara)
4
Transformation solution
1
LB nutrient broth
1
Inoculation loops 
7 (1 pk of 10)
Pipets
5
Foam microcentrifuge tube holder/float
1
Container (such as foam cup) full of crushed ice (not cubed ice)1
Marking pen
1
Copy of Quick Guide
1
Microcentrifuge tubes
2
Common workstation. A list of materials, supplies, and equipment that should be present
at a common location to be accessed by your team is also listed below.
Material
Quantity
Rehydrated pGLO plasmid
1 vial
42°C water bath and thermometer
1
UV Light
1
37°C incubator
1
(optional, see General Laboratory Skills–Incubation)
2–20 µl adjustable volume micropipets
1
2–20 µl micropipet tips
1
36
STUDENT MANUAL
LESSON 2
RasterEdge .NET Document Imaging Trial Package Download Link.
View & Process. XImage.Raster. Adobe PDF. XDoc.PDF. Scanning. XImage.OCR. Microsoft Office. View & Process. XImage.Raster. Adobe PDF. XDoc.PDF. Scanning. XImage.
add a link to a pdf in acrobat; active links in pdf
C# PDF Library SDK to view, edit, convert, process PDF file for C#
RasterEdge PDF SDK for .NET package offers robust APIs for editing PDF document hyperlink (url) and quick navigation link in PDF bookmark.
add links to pdf in preview; pdf link to specific page
Transformation Procedure
1. Label one closed micro test tube +pGLOand another -pGLO. Label both tubes with
your group’s name. Place them in the foam tube rack.
2. Open the tubes and, using a sterile transfer pipet, transfer 250 µl of transformation 
solution (CaCl
2
) into each tube.
37
+pGLO
+pGLO
-pGLO
-pGLO
Transformation Solution
250 µl
STUDENT MANUAL
LESSON 2
How to C#: Basic SDK Concept of XDoc.PDF for .NET
XDoc.PDF for .NET allows C# developers to edit hyperlink of PDF document, including editing PDF url links and quick navigation link in bookmark/outline.
change link in pdf; add hyperlink to pdf acrobat
VB.NET PDF: Basic SDK Concept of XDoc.PDF
XDoc.PDF for .NET allows VB.NET developers to edit hyperlink of PDF document, including editing PDF url links and quick navigation link in bookmark/outline.
adding hyperlinks to pdf files; pdf link to attached file
3. Place the tubes on ice. 
4. Use a sterile loop to pick up 2–4 large colonies of bacteria from your starter plate.
Select starter colonies that are "fat" (ie: 1–2 mm in diameter). It is important to take 
individual colonies (not a swab of bacteria from the dense portion of the plate), since the
bacteria must be actively growing to achieve high transforation efficiency. Choose only
bacterial colonies that are uniformly circular with smooth edges. Pick up the +pGLO tube
and immerse the loop into the transformation solution at the bottom of the tube. Spin the
loop between your index finger and thumb until the entire colony is dispersed in the
transformation solution (with no floating chunks). Place the tube back in the tube rack in
the ice. Using a new sterile loop, repeat for the -pGLOtube.  
5. Examine the pGLO DNA solution with the UV lamp. Note your observations. Immerse
a new sterile loop into the pGLO plasmid DNA stock tube. Withdraw a loopful. There
should be a film of plasmid solution across the ring. This is similar to seeing a soapy
film across a ring for blowing soap bubbles. Mix the loopful into the cell suspension of
the +pGLO tube. Optionally, pipet 10 µl of pGLO plasmid into the +pGLO tube & mix.
Do not add plasmid DNA to the -pGLO tube. Close both the +pGLO and -pGLO tubes
and return them to the rack on ice. 
38
+pGLO
Ice
(+pGLO)
pGLO Plasmid DNA
(+pGLO)
(-pGLO)
(-pGLO)
+pGLO
STUDENT MANUAL
LESSON 2
C# Raster - Raster Conversion & Rendering in C#.NET
add a link to a pdf in preview; pdf link open in new window
VB.NET Word: How to Process MS Word in VB.NET Library in .NET
Besides, here is the quick link for how to process Word document within We are dedicated to provide powerful & profession imaging controls, PDF document, image
change link in pdf file; clickable links in pdf files
6. Incubate the tubes on ice for 10 min. Make sure to push the tubes all the way down in
the rack so the bottom of the tubes stick out and make contact with the ice.
7. While the tubes are sitting on ice, label your four LB nutrient agar plates on the bottom
(not the lid) as follows:
• Label one LB/amp plate:
+ pGLO
• Label the LB/amp/ara plate:
+ pGLO
• Label the other LB/amp plate:
- pGLO
• Label the LB plate:
- pGLO
8. Heat shock. Using the foam rack as a holder, transfer both the (+) pGLO and 
(-) pGLO tubes into the water bath, set at 42oC, for exactly 50 sec. Make sure to
push the tubes all the way down in the rack so the bottom of the tubes stick out and
make contact with the warm water. Double-check the temperature of the water bath
with two thermometers to ensure accuracy.
When the 50 sec are done, place both tubes back on ice. For the best transformation
results, the transfer from the ice (0°C) to 42°C and then back to the ice must be rapid.
Incubate tubes on ice for 2 min.
39
Water bath
L
B
/
a
m
p
pGLO
L
B/
a
m
p/ar
a
pGLO
L
B/
a
m
p
pGLO
L
B
pGLO
Rack
Ice
42°C for 50 sec
Ice
Ice
STUDENT MANUAL
LESSON 2
VB.NET PDF: Create PDF Document Viewer in C#.NET for Document
reading PDF document in ASP.NET web, .NET Windows Forms and mobile developing applications respectively. For more information on them, just click the link and
chrome pdf from link; add link to pdf
VB.NET Word: VB Code to Create Word Mobile Viewer with .NET Doc
For the respective tutorials of these Document or Image Mobile Viewer in VB.NET prorgam, please link to see: PDF Document Mobile Viewer within VB.NET
add a link to a pdf file; convert doc to pdf with hyperlinks
9. Remove the rack containing the tubes from the ice and place on the bench top.
Open a tube and, using a new sterile pipet, add 250 µl of LB nutrient broth to the
tube and reclose it. Repeat with a new sterile pipet for the other tube. Incubate the
tubes for 10 min at room temperature. 
10. Gently flick the closed tubes with your finger to mix and resuspend the bacteria. Using a
new sterile pipet for each tube, pipet 100 µl of the transformation and control suspensions
onto the appropriate nutrient agar plates. 
40
100 µl
Transformation plates
Control plates
L
B
-
p
G
O
L
L
B
/
a
m
p
-
p
G
O
L
L
B
/
a
m
p
+
p
G
O
L
L
B/
a
m
p/ar
a
+
p
G
O
L
LB broth
250 µl
+pGLO
+pGLO
-pGLO
-pGLO
STUDENT MANUAL
LESSON 2
11. Use a new sterile loop for each plate. Spread the suspensions evenly around the 
surface of the LB nutrient agar by quickly skating the flat surface of a new sterile loop
back and forth across the plate surface. DO NOT PRESS TOO DEEP INTO THE AGAR.
Uncover one plate at a time and re-cover immediately after spreading the suspension of
cells. This will minimize contamination.
12.Stack up your plates and tape them together. Put your group name and class period
on the bottom of the stack and place the stack of plates upside down in the 37°C
incubator until the next day. The plates are inverted to prevent condensation on the
lid which may drip onto the culture and interfere with your results. 
41
L
B
-
p
G
O
L
L
B
/
a
m
p
-
p
G
O
L
L
B
/
a
m
p
+
p
G
O
L
L
B/
a
m
p/ar
a
+
p
G
O
L
STUDENT MANUAL
LESSON 2
Lesson 2  Review Questions
Name ___________________
Before collecting data and analyzing your results answer the following questions.
1. On which of the plates would you expect to find bacteria most like the original 
non-transformed 
E. coli
colonies you initially observed? Explain your predictions.
2. If there are any genetically transformed bacterial cells, on which plate(s) would they
most likely be located? Explain your predictions.
3. Which plates should be compared to determine if any genetic transformation has
occurred? Why?
4. What is meant by a control plate? What purpose does a control serve?
42
STUDENT MANUAL
LESSON 2
Lesson 3  Data Collection and Analysis
A.  Data Collection 
Observe the results you obtained from the transformation lab under normal room lighting.
Then turn out the lights and hold the ultraviolet light over the plates. Alternatively the protocol
can incorporate digital documentation of the plates with Vernier’s Blue Digital BioImaging
System (Appendix E).
1. Carefully observe and draw what you see on each of the four plates. Put your drawings
in the data table below. Record your data to allow you to compare observations of the
“+ pGLO” cells with your observations for the non-transformed 
E. coli
. Write down the
following observations for each plate.
2.  How much bacterial growth do you see on each plate, relatively speaking?  
3.  What color are the bacteria?  
4.  How many bacterial colonies are on each plate (count the spots you see). 
Observations
+pGLO
LB/amp
+pGLO
LB/amp/ara
Observations
-pGLO
LB/amp
-pGLO
LB
43
Control plates
Transformation plates
STUDENT MANUAL
LESSON 3
B.  Analysis of Results
The goal of data analysis for this investigation is to determine if genetic transformation
has occurred.
1. Which of the traits that you originally observed for 
E. coli
did not seem to become
altered? In the space below list these untransformed traits and how you arrived at this
analysis for each trait listed.
Original trait
Analysis of observations
2. Of the 
E. coli
traits you originally noted, which seem now to be significantly different
after performing the transformation procedure? List those traits below and describe the
changes that you observed.
New trait
Observed change
3. If the genetically transformed cells have acquired the ability to live in the presence of the
antibiotic ampicillin, then what might be inferred about the other genes on the plasmid that
you used in your transformation procedure? 
4. From the results that you obtained, how could you prove that the changes that occurred
were due to the procedure that you performed?
44
STUDENT MANUAL
LESSON 3
Documents you may be interested
Documents you may be interested